2.1. Muestras en estudio:
Obtenidas a partir de las úlceras y abscesos de casos sospechosos de leishmaniasis cutánea de individuos que concurrieron al Laboratorio de Análisis Clínicos de la UNAS, durante el lapso comprendido entre Mayo de 1994 y Mayo de 1995.
2.2. Obtención y Procesamiento de las muestras:
Las muestras obtenidas se procesaron en el Laboratorio de Análisis Clínicos de la UNAS.
La toma de muestra se realizó directamente de la lesión, aplicando el método de la torunda humedecida para absorber la secreción presente en la herida, si el caso lo ameritaba, se practicaba una punción con estilete o bisturí para drenar el absceso observado.
El contenido de la úlcera en la torunda se cultivaba para pre-enriquecimiento en Caldo Cerebro-Corazón (BHI), Caldo Peptona Tamponada, Caldo Carne para Anaerobios y Caldo Mueller Hinton, por espacio de 8 a 16 hs a 37_C. Al termino del pre-enriquecimiento no selectivo se hicieron repiques en medios sólidos enriquecidos y selectivos tales como Agar Sangre, Agar Azida de Sodio, Medio CLED, Medio Anaeróbico de Brewer y, Medio Maltosa, Agar Sabouraud-Glucosa estos últimos para hongos. Los medios sembrados con los repiques se incubaron por 24-48 hs, a 37_C y por 5 días a 28_C (hongos).
2.3. Verificación e Identificación de Microorganismos:
Al termino de la incubación de los medios selectivos y de enriquecimiento se constató el desarrollo de microorganismos tanto de bacterias como de hongos. Se anotaron sus características de crecimiento, aspecto de la colonia, pigmentación, con la finalidad de lograr su identificación en la siguiente fase.
Se identificaron los microorganismos desarrollados por la aplicación de lo métodos de siembra sobre medios bioquímicos diferenciales tales como:
- Caldo Triptófano-Indol,
- Caldo MRVP,
- Citrato de Simmons,
- Caldo Malonato,
- Caldo Sorbitol,
- Caldo Glucosa,
- Caldo Maltosa,
- Producción de Ureasa,
- Descarboxilación de Lisina y Arginina,
- Desarrollo sobre TSI,
- Desarrollo sobre LIA.
2.4. Determinación de la Sensibilidad a los antimicrobianos:
Se utilizó el Método Estandarizado por la FDA para Antibiogramas (Kirby Bauer), utilizando discos de papel filtro de 6 mm de diámetro embebidos en soluciones de diferente concentración de antibióticos y quimioterápicos, para el caso de las bacterias. La concentración de microorganismos utilizados para la prueba fue aproximadamente similar a la del tubo Nº 2 de Mac Farland (unos 300,000 m.o. por ml).
La lectura de los halos de inhibición se hizo en milímetros de diámetro y la interpretación se basó en la presencia de mayor, mediano o menor diámetro verificado alrededor de la colonia bacteriana.
